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제 목 : 유세포 분석기(Flow cytometer)를 이용한 세포 자가사멸(apotosis) 분석
작성자 관리자 등록일 2021년 05월 10일 17시 41분
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. 기술 정보

기술명

유세포 분석기(Flow cytometer)를 이용한 세포 자가사멸(apotosis) 분석

목적

세포의 자가사멸을 확인하기 위한 시험

담당팀

세포생리팀

작성자

김해정

 

. 기술내용

기술

내용

줄기세포를 제외한 거의 모든 세포는 발생과정 중에서 조직이나 기관을 생성하거나, 발생과정이 끝난 후 유지하는 동안 일정 기간이 지나거나, 세포 분열과정중 잘못된 과정으로 생성되는 세포가 발생하는등 다양한 원인에 의해 스스로 죽는 자가사멸 (apoptosis) 기작을 갖고 있다.

자가사멸 이외에 감염이나 외부 자극 요인에 의해 감자기 세포가 피해를 입어 세포가 죽게 되는 괴사 (necrosis)도 있으며, 자가사멸이냐 괴사냐에 따라 영향도 다르다.

이에 세포의 죽음이 자가사멸인지 괴사인지 구분하는 것이 필요하며 자가사멸은 형광을 결합시킨 Annexin V7AAD를 이용하여 측정한다.

실험

방법

1. Annexin V

- 정상세포의 경우 phospholipids 성분 중 phosphatidylserine (PS)은 안쪽 세포막 (inner membrane)에 존재 합니다. 그러나 세포가 apoptosis를 일으키게 되면 PS이 바깥쪽 세포막 (outer membrane)으로 이동하게 됩니다. 이러한 PS의 이동이 apoptosis의 중요한 특징 중 하나입니다.

- 따라서 Annexin V에 형광을 결합시킨 후 이를 Ca2+이 있는 용액에 세포와 함께 넣어주면 세포막에 결합되어 있는 Annexin V의 양을 형광 값으로 측정할 수 있고, 이를 이용해 apoptosis를 확인하게 됩니다.

2. 7-Aminoactinomycin D (7AAD)

- 7AADDNA에 결합하는 형광 chemical로 정상세포는 세포막을 투과하지 못해 세포 내로 흡수되지 않지만 세포막이 손상된 apoptotic/necrotic 세포에서 세포막을 투과하여 핵 안에 있는 DNA와 결합하여 형광을 나타내게 됩니다.