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제 목 : 세포독성시험
작성자 관리자 등록일 2021년 05월 10일 17시 39분
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기술 정보서

 

. 기술 정보

기술명

세포독성시험

목적

in vitro상에서 세포에 독성이 없는 시료의 농도를 확인하는 시험

담당팀

세포생리팀

작성자

김해정

 

. 기술내용

기술

내용

세포독성(cytotoxicity)이란 세포에 대한 독성으로 연속희석 (serial dilutoin)한 시료를 처리한 세포를 일정시간 배양했을 때 세포 생존에 영향을 주지 않는 최대 농도를 찾기 위한 시험이다.

세포 생존율은 살아있는 세포에서 세포 내 기관인 미토콘드리아(mitochondria)에서 활성을 나타내는 탈수소효소(dehydrogenase)와 반응하는 tetrazolium salts 성분의 시약(Cell counting-8, MTT, WST-1)을 이용하는 것으로, tetrazolium saltsdegydrogenase에 의해 환원되면 생성되는 formazan에 의한 색 변화 정도를 측정, 세포 생존율을 알아보는 시험이다.

실험

방법

세포를 96 well plate에 적절한 수로 well100 씩 분주 한 뒤 CO2 incubator에서 37, 5% CO2조건으로 24시간 배양

세포 배양액에 시료를 처리하고, 동일한 배양 조건에서 72시간 배양한다.

시료 처리 후 배양시간이 끝나면 각 시간대 별로 확인할 시료에 살아있는 세포를 측정할 수 있는 시약 (Cell counting-8, MTT, WST-1)등을 처리한 뒤 microplate reader를 이용해 적정 흡광도로 측정한다.

결과는 시료를 처리하지 않은 대조군과 시료를 처리한 군을 비교하여 세포생존율(%)를 계산한다.

세포생존율이 95% 이하로 감소하는 시료의 농도를 확인한다.